Các vi khuẩn Helicobacter pylori bắt màu tím đỏ ở khe tuyến, vùng chất nhầy trên bề mặt biểu mô phủ dạ dày.
CHUẨN BỊ
- Người thực hiện
Kỹ thuật viên giải phẫu bệnh - tế bào bệnh học: 02
- Phương tiện, hóa chất
Phương tiện, hóa chất chung
Dung dịch cố định bệnh phẩm. Cồn (70°, 80°, 95° , 100°).
Xylen. Nước cất 2 lần. Parafin.
Nồi chưng cách thủy, máy cắt tiêu bản. Lưỡi dao cắt lát mỏng. Tủ ấm 37° – 56°.
Tủ lạnh. Điều hòa nhiệt độ. Tủ hốt phòng thí nghiệm. Nguồn cấp nước chảy.
Bể nhuộm bằng thủy tinh. Bể thủy tinh đựng cồn, xylen. Hộp thủy tinh đựng parafin.
Khuôn nhựa. Giá đựng tiêu bản (đứng và nằm ngang).
Cốc đong loại 1000ml, 500ml, 100ml và 50ml. Ống hút bằng nhựa. Kẹp không mấu, kéo.
Giấy lọc. Phiến kính, lá kính. Bôm Canada hoặc keo gắn lá kính.
Kính hiển vi 2 mắt để kiểm tra kết quả nhuộm.
Kính phòng hộ, găng tay các loại, khẩu trang, áo choàng phẫu thuật.
Phương tiện, hóa chất riêng biệt cho kỹ thuật
Phẩm nhuộm Giemsa.
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
- Cố định
Bệnh phẩm được lấy ra khỏi cơ thể được cố định ngay trong dung dịch formol đệm trung tính 10% với tỷ lệ thể tích dung dịch cố định nhiều gấp 20 -30 lần thể tích bệnh phẩm. Thời gian cố định từ 2-12 giờ tuỳ theo mảnh bệnh phẩm to hay nhỏ.
Sau cố định, bệnh phẩm được thực hiện qua các khâu kỹ thuật sau:
- Chuyển bệnh phẩm
- Vùi parafin
- Đúc khối parafin
- Cắt và dán mảnh cắt
- Nhuộm mảnh cắt
Chuẩn bị phẩm nhuộm
Phẩm nhuộm Giemsa
Khi dùng, lấy Giemsa mẹ pha loãng với nước cất, tỷ lệ Giemsa/nước cất là 1/4. Lưu ý là độ pH nên bằng 7,2
Các bước tiến hành
Mảnh cắt được tẩy nến như thường lệ (qua xylen, cồn).
Rửa nước
Nhuộm tiêu bản trong dung dịch Giemsa đã pha loãng trong 10 phút.
Rửa nước
Loại phẩm thừa bằng cồn 95°
Gán lá kính bằng bôm Canada.
KẾT QUẢ
Các vi khuẩn Helicobacter pylori (HP) bắt màu tím đỏ.
NHỮNG SAI SÓT VÀ HƯỚNG XỬ TRÍ
- Các mảnh cắt quá dầy, không có phần niêm mạc sẽ không phát hiện được HP.
- Dung dịch dán mảnh cắt bị nhiễm khuẩn: sẽ ngộ nhận các vi khuẩn khác với HP, trường hợp này cần thay dung dịch dán mảnh cắt.
- Thời gian nhuộm lâu hoặc nồng độ Giemsa cao đều làm cho mô bắt màu mạnh, chuyển màu xanh đen, khó nhận định kết quả, xử lý bằng cách làm nhạt màu qua cồn.
- Nước dùng để rửa có nhiều cặn bẩn gây cặn bẩn trên tiêu bản, khó đánh giá kết quả, cần sử dụng nguồn nước sạch và sử dụng lõi lọc nếu cần.
- Thuốc nhuộm cũng có thể bị cặn và nhiễm vi khuẩn làm ảnh hưởng đến việc đánh giá kết quả, nên thay thuốc nhuộm mới.
- Dung dịch Giemsa pha loãng chỉ pha trước khi nhuộm.
GIỚI THIỆU VÀI NÉT VỀ KHOA GIẢI PHẪU BỆNH
- Nhân lực: Có 01 Bác sĩ CKI Giải phẫu bệnh, 03 KTV Trang thiết bị: Được Bệnh viện trang bị cho các trang thiết bị mới và hiện đại như Hệ thống bàn đúc tự động, Máy cắt tiêu bản sử dụng dao cắt 1 lần, Máy cắt lạnh, Tủ hút khí độc đạt tiêu chuẩn .v.v… giúp cho công việc được thuận lợi và đảm bảo chất lượng xét nghiệm. Cố định: Bệnh phẩm lấy ra khỏi cơ thể được đưa ngay vào dung dịch cố định (formol đệm trung tính 10%) với tỷ lệ thể tích dung dịch cố định nhiều gấp 20- 30 lần thể tích bệnh phẩm. Thời gian cố định từ 2-24 giờ tuỳ theo mảnh bệnh phẩm to hay nhỏ.